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技术分享 || 细胞培养技术知识汇总

Q3894 温度对细胞培养的影响?





A:如下

♀ 温度是哺乳动物细胞培养的重要的控制参数,根据先验知识,通常在培养前期将温度控制在36℃~37℃左右,此时的培养温度最适合于细胞生长。但在培养中后期,降低培养温度有助于提高产物的比生产速率,从而提高产量,其主要原因是降低培养温度能够增加目标蛋白mRNA的稳定性,有助于细胞对目标蛋白的分泌;细胞培养后期的温度一般选定在31~34℃,最优的降温温度需要根据实验研究确定;

♀ 培养温度同时也会影响蛋白异质性,从而影响质量。例如较高的培养温度可能会产生较多的片段、较多的酸性蛋白,同时也会影响合成N-糖型的关键酶,而纯度、糖型通常为蛋白分子的CQA,故后期培养温度的选择对于蛋白生产至关重要,需对其进行研究并严格控制。

       

Q3895 pH对细胞培养的影响?





A:如下

♀ 合适的pH范围对维持正常的细胞生理活动至关重要,通常哺乳动物细胞生长最适的pH为6.6~7.4之间,pH过高或过低均会对细胞生长产生不利的影响;

♀ pH控制也会影响蛋白质量,较低的pH会抑制酸性蛋白的产生,降低唾液酸的含量,对于CHO细胞而言,pH通常控制在6.7-7.3之间,最优的控制策略需要根据实验优化结果进行确定。

       

Q3896 DO对细胞培养的影响?





A:如下

♀ 动物细胞是好氧生物,充足的氧气供应是维持细胞生命的前提,但是由于氧气在水中的溶解度较小,故需要以连续通氧的方式进行供氧。一般DO水平控制在40%左右,通过反应器的PID精确的控制,从而能够实现DO水平>20%。根据先验知识,DO在20%~80%的范围内对细胞生长和质量无显著影响。

♀ 过高和过低的DO水平均会影响细胞培养工艺性能,但是CHO细胞在较宽的范围内对其的依赖性较小,故通常DO不作为关键工艺参数进行研究。一般均采用平台控制策略。

          

Q3897 初始接种密度对细胞培养的影响?





A:如下

♀ 较高的初始接种密度有助于缩短细胞在适应期的时间,从而减少到达活细胞密度峰值的时间,增加IVCD,从而提高产量;

♀ 较高的初始接种密度可能会影响补料添加的时间和补料量,同时可能会影响收获时的细胞活率。故在工艺优化时,通常在摇瓶规模对初始接种密度进行研究,以确定最佳的接种密度。

         

Q3898 渗透压对细胞培养的影响?





A:如下

♀ 细胞培养环境中渗透压的高低会影响细胞生长的状态,过高或者过低的渗透压均会对细胞产生不利的影响,一般细胞培养液的渗透压维持在28~400 Osmo/Kg之间;

♀ 适当提高渗透压有助于细胞对产物的分泌,故在细胞培养后期通常将渗透压维持在350 Osmo/Kg以上。同时较高的渗透压会降低蛋白聚集水平、提升唾液酸水平。

       


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