问题137 细胞培养葡萄糖浓度控制的依据是什么?
回答:如下 o 培养液中葡糖糖的浓度可能会影响细胞乳酸代谢和产物糖型的分布 o 一般无乳酸积累的项目,第2天葡萄糖浓度一般控制在2~4g/L之间,如存在乳酸问题,则第2天葡萄糖浓度一般控制在1~2g/L之间 o 若乳酸积累较为严重,则将2分子乳酸当成1分子葡萄糖来计算,让第2天葡萄糖浓度一般控制在1~2g/L之间
|
问题138 收获细胞活率对细胞培养及纯化有何影响?
回答:如下 · 收获细胞活率低,大量细胞裂解释放蛋白水解酶,对目的产物有降解作用 · 收获细胞活率低,影响细胞对蛋白的表达 · 收获细胞活率低,产物的电荷异质性、糖基化水平等会受其影响 · 收获细胞活率低,细胞裂解释放的宿主细胞蛋白、DNA等杂质较多,会增加纯化难度和成本 |
问题139 提高Titer的方法有哪些?
回答:如下抗体的最终产量主要取决于抗体的比生成速率、活细胞密度以及培养时间三个关键参数 o 提高产物的比生成速率(稳定高产细胞株的建立、培养过程参数的优化、2添加刺激抗体表达的化学物质) o 延长培养时间:通过特殊手段调节动物细胞的代谢状态,使细胞能更有效的利用营养物质以减少代谢副产物的产生;通过基因工程的手段过量表达这些抗凋亡基因,抑制细胞凋亡,进而延长细胞培养时间,最终达到提高产物产量的目的 o 提高细胞密度:无血清培养基的设计与优化、流加培养过程的优化、生物反应器的优化与放大 |