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抗体药物研发问答 《细胞培养》

问题137 细胞培养葡萄糖浓度控制的依据是什么?

回答:如下

o      培养液中葡糖糖的浓度可能会影响细胞乳酸代谢和产物糖型的分布

o      一般无乳酸积累的项目,第2天葡萄糖浓度一般控制在2~4g/L之间,如存在乳酸问题,则第2天葡萄糖浓度一般控制在1~2g/L之间

o      若乳酸积累较为严重,则将2分子乳酸当成1分子葡萄糖来计算,让第2天葡萄糖浓度一般控制在1~2g/L之间

             

问题138 收获细胞活率对细胞培养及纯化有何影响?

回答:如下

·           收获细胞活率低,大量细胞裂解释放蛋白水解酶,对目的产物有降解作用

·           收获细胞活率低,影响细胞对蛋白的表达

·           收获细胞活率低,产物的电荷异质性、糖基化水平等会受其影响

·           收获细胞活率低,细胞裂解释放的宿主细胞蛋白、DNA等杂质较多,会增加纯化难度和成本

             

问题139 提高Titer的方法有哪些?

回答:如下抗体的最终产量主要取决于抗体的比生成速率、活细胞密度以及培养时间三个关键参数
 
 

o   提高产物的比生成速率(稳定高产细胞株的建立、培养过程参数的优化、2添加刺激抗体表达的化学物质)

o   延长培养时间:通过特殊手段调节动物细胞的代谢状态,使细胞能更有效的利用营养物质以减少代谢副产物的产生;通过基因工程的手段过量表达这些抗凋亡基因,抑制细胞凋亡,进而延长细胞培养时间,最终达到提高产物产量的目的

o   提高细胞密度:无血清培养基的设计与优化、流加培养过程的优化、生物反应器的优化与放大


 


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